Hoechst (barwnik)
Z Wikipedii
Hoechst - rodzina barwników fluorescencyjnych, bis-benzimidazoli, wybarwiających DNA na zasadzie interkalacji [1][2]. Powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych, chromosomów lub mitochondriów (poprzez wizualizację DNA) w mikroskopii fluorescencyjnej [3][4]. Najpopularniejsze z rodziny są barwniki Hoechst 33258 oraz Hoechst 33342. Nazwa tych barwników pochodzi od nazwy niemieckiej firmy farmaceutycznej Hoechst AG.
Barwniki te (33258 i 33342) są wzbudzane światłem ultrafioletowym przy długości fali świetlnej około 345nm. Maksimum emisji wypada przy około 485nm (kolor niebiesko-fioletowy) [5]. Ponieważ Hoechst przenika przez nienaruszone błony biologiczne, może być używany do wybarwiania zarówno żywych komórek[6] jak i utrwalonych i często bywa używany jako substytut innego barwnika - DAPI [7]. Różnica pomiędzy nimi, wynika z tego, że Hoechst 33342, wyposażony w dodatkową grupę etylową, jest bardziej lipofilowy, w związku z czym lepiej przenika przez nienaruszone błony biologiczne. Z kolei Hoechst 33258, w niektórych zastosowaniach, ma znaczącą mniejszą zdolność penetracji komórek [7].
Barwniki Hoechst nadają się także do ilościowego oznaczania DNA w próbie, gdyż siła ich sygnału jest wprost proporcjonalna do ilości DNA (por. prawo Lamberta-Beera) [8][9].
Ponieważ Hoechst wiążą się bardzo ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym wpływają na jego strukturę, i mogą zaburzać replikację, związki te są toksyczne i mutagenne. Przy pracy z Hoechst powinno się zachować szczególną ostrożność.
 |
|
Przypisy
- ↑ Comings DE. Mechanisms of chromosome banding. VIII. Hoechst 33258-DNA interaction.. Chromosoma. Oct 14;52, 3, 229-43. 1976. PMID 1183300.
- ↑ Giartosio A., Ferraro A., Lavaggi MV., Allegra P., Turano C. The interaction of bisbenzimide with DNA.. Physiol Chem Phys Med NMR. 16, 6, 481-90. 1985. PMID 6085701.
- ↑ Herzog A., Schütze HR. [Fluorescent staining of mammalian chromosomes with a basically substituted bis-benzimidazole derivative (preparation 33258 "Hoechst")]. Dtsch Tierarztl Wochenschr. Oct 1;75, 19, 476-9. 1968. PMID 4176386.
- ↑ Lemke PA., Kugleman B., Morimoto H., Jacobs EC., Ellison J. Fluorescent staining of fungal nuclei with a benzimidazol derivative.. J Cell Sci. Feb;29, 77-84. 1978. PMID 75211.
- ↑ Fluorochrome Absorption Emission Wavelengths (en). Science Gateway. [dostęp 9-05-08].
- ↑ Gregoire M., Hernandez-Verdun D., Bouteille M. Visualization of chromatin distribution in living PTO cells by Hoechst 33342 fluorescent staining.. Exp Cell Res. May;152, 1, 38-46. 1984. PMID 6201374.
- ↑ 7,0 7,1 Otto F., Tsou KC. A comparative study of DAPI, DIPI, and Hoechst 33258 and 33342 as chromosomal DNA stains.. Stain Technol. Jan;60, 1, 7-11. 1985. PMID 2579484.
- ↑ Downs TR., Wilfinger WW. Fluorometric quantification of DNA in cells and tissue.. Anal Biochem. Jun;131, 2, 538-47. 1983. PMID 6193739.
- ↑ Araki T., Yamamoto A., Yamada M. Accurate determination of DNA content in single cell nuclei stained with Hoechst 33258 fluorochrome at high salt concentration.. Histochemistry. 87, 4, 331-8. 1988. PMID 2447036.
