Pasażowanie komórek
Z Wikipedii
Pasażowanie komórek - technika stosowana przy hodowli komórek somatycznych.
Ponieważ komórki dzielą się mitotycznie, dłuższy okres hodowli powoduje całkowite zapełnienie naczynia hodowlanego, zubożenie podłoża i - najczęściej - śmierć komórek. Pasażowanie polega na przeniesieniu komórek ze starego naczynia hodowlanego do nowych naczyń, zawierających świeżą pożywkę. Proporcja pasażowania oznacza w ilu nowych naczyniach umieszcza się komórki z jednego starego naczynia o tej samej powierzchni lub objętości; np. pasażowanie 1:5. Pasażowanie linii komórkowych umożliwia hodowanie nowych pokoleń identycznych komórek praktycznie w nieskończoność.
Pasażowanie komórek zwierzęcych
Komórki zwierzęce hodowane są w laboratoriach w postaci zawiesinowej (komórki nieadherentne, np. limfocyty), lub adheretnej (np. komórki śródbłonka).
Pasażowanie komórek zawiesinowych, polega na ich zebraniu z naczynia hodowlanego, zwirowaniu przy przeciążeniu ok. 200 g (zwykle przez 5-10 minut), a następnie zawieszeniu w większej ilości medium i przeniesieniu do większej liczby naczyń hodowlanych.
Pasażowanie komórek adherentnych zwane jest również trypsynizacją, gdyż stosuje się w tym celu enzym trypsynę, zwykle w stężeniu 0,25%. Trypsyna trawi białka błony plazmatycznej komórek, którymi przyczepiają się one do podłoża, dzięki czemu komórki przechodzą do zawiesiny. Ponieważ trypsyna trawi również białka błony niezbędne do życia komórek, po ich odczepieniu dodaje się medium zawierające inhibitor trypsyny. W tym momencie komórki znajdują sie w zawiesinie, toteż postępuje się z nimi dalej tak, jak przy pasażowaniu komórek zawiesinowych. Po umieszczeniu w nowych naczyniach hodowlanych komórki po kilku-kilkunastu godzinach ulegają ponownej adherencji.
